Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật - Bài 5: Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật - Phan Lữ Chính Nhân
Lưu ý
• Hạn chế tối đa thời gian tiếp xúc của enzyme
phân tách với tế bào
• Chọn nồng độ tối thiểu enzyme phân tách tuỳ
loại tế bào
• Sử dụng các chất ức chế hoạt tính enzym ngay
sau khi phân tách (FBS, protease inhibitor)
• Hạn chế tối đa thời gian tiếp xúc của enzyme
phân tách với tế bào
• Chọn nồng độ tối thiểu enzyme phân tách tuỳ
loại tế bào
• Sử dụng các chất ức chế hoạt tính enzym ngay
sau khi phân tách (FBS, protease inhibitor)
36 trang
09/11/2022
6240
Bạn đang xem 20 trang mẫu của tài liệu "Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật - Bài 5: Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật - Phan Lữ Chính Nhân", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên.
File đính kèm:
- bai_giang_ky_thuat_cay_chuyen_va_tao_dong_te_bao_dong_vat_ph.pdf
Nội dung text: Bài giảng Nuôi cấy tế bào động vật - Bài 5: Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật - Phan Lữ Chính Nhân
- Tăng sinh 13 (Regenerative Medicine, 2006)
- Tiêu chí lựa chọn dòng tế bào cho thí nghiệm • Loài • Đặc điểm chức năng • Hữu hạn hay liên tục • Bình thường hay chuyển dạng • Điều kiện và đặc tính tăng trưởng
- • Cùng kiểu gen, hình thái • quần thể tế bào như nhau ở đặc điểm quan tâm. 16
- Douglas C. McFarland Methods in Cell Science 22: 63–66 (2000). Mô Phân tách Tế bào đơn Nuôi sơ cấp Pha loãng tới hạn Vòng nhẫn Tách tế bào tự động Clone phát triển 17
- Giếng tế bào gốc 1 lần ãng Lo pha Chuỗi Chuỗi pha Loãng lần 2
- Nhuộm crystal violet
- • Sử dụng đĩa 96 giếng; 100 ul/giếng • Mật độ tế bào ban đầu: 200 - 4000 tế bào/giếng gốc • Giảm dần mật độ tế bào trong mỗi giếng • Nên cấy chuyền sang đĩa 24 12 6 giếng (đĩa 35 mm) flask 25 flask 75
- VÒNG NHẪN (Cloning ring) 23
- Phân lập Clones (Huyền phù)
- Xây dựng đường cong-đo sự phát triển Xác định số lượng tế bào sau mỗi 24 giờ vẽ biểu đồ, xác định thời gian nhân đôi quần thể Thiết bị: máy đếm tế bào tự động, buồng đếm hồng cầu Buồng đếm hồng cầu Đường cong tăng trưởng Máy đếm tế bào tự động (Nucleocouter)
- 28 In vivo Phân tích flowcytometry In vitro: biệt hóa tế bào, nhuộm kiểm tra
- • dòng tế bào bị thoái hóa: Clone ko phát triển mãi, có thể biến đổi, đặc điểm mong muốn thay đổi • 1 tế bào khó sống môi trường đặc biệt, bổ sung GF, đồng nuôi cấy • Dòng tế bào có vòng đời (thời gian phân chia) giới hạn, sau vài lần cấy chuyền sẽ lão suy • Đại thực bào và tế bào thần kinh không phân chia in vitro > có thể dùng như nuôi sơ cấp 30
- • TBG được thu nhận và cấy ghép vào 1 phần mô người, hỗ trợ sự phát triển cơ quan
- Cloning from adults
- • Tiến bộ trong hiểu biết về ung thư • Tiến bộ trong sinh học tế bào • Công nghệ máu cuống rốn, bệnh leukemia, thải loại trong cấy ghép • Công nghệ chuyển nhân tế bào sinh dưỡng (SCNT) • Sản xuất tế bào đột biến • Phát hiện thuốc và quá trình biến dưỡng 35
- • Cải tiến di truyền: tăng năng suất tạo sản phẩm sinh học • Dòng tế bào ung thư: thử nghiệm chất kháng phân bào • Dòng fibroblast: thử nghiệm tính gây kích thích của mỹ phẩm 36
