Ứng dụng kỹ thuật pcr và giải trình tự gen định danh nấm đường sinh sản ở phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ (18 - 49 tuổi) đã có chồng tại Thị xã Quảng Yên tỉnh Quảng Ninh (2013 - 2014)

Nội dung text: Ứng dụng kỹ thuật pcr và giải trình tự gen định danh nấm đường sinh sản ở phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ (18 - 49 tuổi) đã có chồng tại Thị xã Quảng Yên tỉnh Quảng Ninh (2013 - 2014)

1. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR VÀ GIẢI TRÌNH TỰ GEN ĐỊNH DANH NẤM ĐƢỜNG SINH SẢN Ở PHỤ NỮ TRONG ĐỘ TUỔI SINH ĐẺ (18 - 49 TUỔI) ĐÃ CÓ CHỒNG TẠI THỊ XÃ QUẢNG YÊN TỈNH QUẢNG NINH (2013 - 2014) Cao Bá Lợi*; Vũ Quyết Thắng* và CS TÓM TẮT 398 phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ (18 - 49 tuổi) đã có chồng tại thị xã Quảng Yên, tỉnh Quảng Ninh được khám sản khoa và lấy mẫu xét nghiệm dịch âm đạo tìm ký sinh trùng. Kết quả: 116 phụ nữ nhiễm Candida sp. bằng phương pháp nuôi cấy trong môi trường Sabouraud, sau đó, những phụ nữ này được xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR với gen mồi ITS1 và ITS4 và sử dụng enzym phân cắt hạn chế Msp I để định danh loài nấm, kết quả: 95/106 (89,6%) mẫu cho kết quả (+). Lựa chọn 95 mẫu tiến hành thôi gel, 51 mẫu cho kết quả 2 băng, tiến hành thôi gel mỗi một băng ADN riêng rẽ và thu từng băng để giải trình tự. Truy cập Ngân hàng Gen và phân tích giám định loài 51 chuỗi gen cho thấy: 27 mẫu C. glabrata, 15 mẫu C. albicans, 6 mẫu C. tropical, 2 mẫu C. parapsilosis, 1 mẫu C. krusei. * Từ khóa: Nấm đường sinh sản; PCR; Phụ nữ độ tuổi sinh đẻ; Quảng Ninh. Application of PCR and Electrophoresis Gel Sequencing for Quantification of Vaginal Candidiasis in 398 Married Women at Reproductive Age (18 - 49) in Quangyen, Quangninh (2013 - 2014) Summary The research was conducted in Quangyen, Quangninh provice on 398 married women at reproductive age (18 - 49). Obstetric examination was carried out, vaginal samples were examined by Gram staining and cultured in Sabouraud medium for yeart gentital tract. The result showed that 116 samples infected with Candida spp. 106/116 samples were tested using PCR at Vietnam Institute of Biotechnology with ITS 1 - ITS4 target gene resulting in 95/106 (89.6%) positive samples. Selection of 51 samples in total of 95 positive samples were subjected to gel purifiel DNA from electrophoresis gel sequencing. PCR product made 2 saparated bands, it was purified seperately. * Viện Sốt rột - Ký sinh trựng và Côn trùng TW Người phản hồi (Corresponding): Cao Bá Lợi (saudaihocvsr2008@gmail.com) Ngày nhận bài: 09/10/2014; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 20/11/2014 Ngày bài báo được đăng: 26/11/2014 59
2. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 The order of the nucleotide sequence was handled by specialized software, with reference sequence in gene banks. Results: 27 samples were as C. glabrata, 15 samples purified as C. albicans, 6 samples as C. tropical, 2 samples known as C. parapsilosis and and 1 samples as C. krusei. * Key words: Vaginal candidiasis; PCR; Women at reproductive age; Quangninh province. ĐẶT VẤN ĐỀ đã có chồng tại thị xã Quảng Yên, tỉnh Quảng Ninh. Tại Việt Nam, các bệnh nhiễm trùng đường sinh sản (ĐSS) có xu hướng tăng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP cao do nhiều nguyên nhân như: thói quen NGHIÊN CỨU sinh hoạt mất vệ sinh, nguồn nước bị ô 1. Đối tƣợng, địa điểm và thời gian nhiễm, tệ mại dâm, tình trạng nạo phá nghiên cứu. thai không kiểm soát dẫn đến tình trạng - Đối tượng nghiên cứu: phụ nữ trong nhiễm trùng ĐSS, đặc biệt nhiễm nấm độ tuổi sinh đẻ (18 - 49) đã có chồng, tình Candida sp. ĐSS. Vũ Đức Bình và CS nguyện tham gia nghiên cứu. (2013) nghiên cứu trên phụ nữ 18 - 49 đã - Địa điểm nghiên cứu: có chồng tại huyện Tam Nông, Phú Thọ + Lấy mẫu bệnh phẩm tại thị xã Quảng bằng kỹ thuật PCR và giải trình tự gen Yên, tỉnh Quảng Ninh. nấm ký sinh ĐSS thấy: tỷ lệ nhiễm Candida sp. ĐSS là 30,5%, trong đó, + Tiến hành kỹ thuật PCR giải trình tự gen nấm tại Phòng Miễn dịch học, Viện Candida glabrata (C. glabrata) chiếm 43,5%, Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa Candida tropicalis (C. tropicalis) 34,8%, học Việt Nam. Candida albicans (C. albicans) 14,6%, Candida krusei (C. krusei) 4,3% và Candida - Thời gian nghiên cứu từ 4 - 2014 đến parapsilosis (C. parapsilosis) 2,8% [1, 2]. 10 - 2014. 2. Phƣơng pháp nghiên cứu. Tại Quảng Ninh nói chung và thị xã Quảng Yên nói riêng đến nay chưa có - Cỡ mẫu nghiên cứu: cỡ mẫu điều công trình nghiên cứu nào đi sâu và đầy tra cắt ngang đánh giá tình trạng nhiễm nấm ĐSS là 384, trong thực tế chúng tôi đủ về tình trạng nhiễm nấm ĐSS ở phụ nghiên cứu 398 mẫu. nữ trong độ tuổi sinh đẻ, nhưng các yếu tố nguy cơ nhiễm nấm ĐSS rất cao. Với Thực hiện kỹ thuật PCR giải trình tự tính cấp thiết của vấn đề và để xác định gen 106/116 mẫu nấm. tỷ lệ thành phần loài nấm ĐSS, chúng tôi - Thu thập và bảo quản mẫu [3, 4]: thực hiện nghiên cứu với mục tiêu: Ứng gồm các bệnh phẩm lấy từ dịch âm đạo dụng kỹ thuật PCR và giải trình tự gen tại cùng đồ sau, sau đó, nuôi cấy trong xác định tỷ lệ, thành phần loài nấm ĐSS ở môi trường Sabouraud có kháng sinh phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ (18 - 49 tuổi) chloramphenicol, pH = 5,0. 60
3. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Các mẫu bệnh phẩm (+) với nấm - Bổ sung 100 µl NaCl 5 M, 100 µl Candida spp. mỗi mẫu cho vào túi riêng CTAB/NaCl (4,1 g NaCl; 10 g CTAB; biệt và chuyển về Phòng Miễn dịch học, trong 100 ml nước), làm nóng đến 65oC, Viện Công nghệ Sinh học. Bảo quản ở lắc xoáy đến khi toàn bộ dịch chuyển ngăn mát (4 - 100C) (tủ lạnh thường) đến sang màu trắng sữa và ủ 65oC trong 10 khi tiến hành tách ADN tổng số. phút. * Tách chiết ADN tổng số [3, 4]: - Bổ sung 450 µl hỗn hợp chloroform/ Tiến hành tách ADN tổng số (ADN hỗn isoamyl alcohol 24:1 và lắc xoáy trong 10 hợp của tế bào nấm) theo quy trình sau: giây. Ly tâm 13.000 vòng/phút trong 5 phút. - Dùng que cấy (loop) lấy đầy tế bào - Chuyển dịch nổi sang ống Eppendorf nấm từ bề mặt ống nuôi cấy và chuyển mới, bổ sung 450 µl isopropanol, ủ trong vào ống Eppendorf (dung tích 1,5 ml). đá 10 phút. - Bổ sung 400 µl đệm TE (500 µl Tris-HCl - Ly tâm 13.000 vòng/phút trong 15 phút; pH 6,8 1 M; 100 µl EDTA, pH8 0,5 M và loại bỏ dịch nổi. Bổ sung 500 µl ethanol nước đến tổng số 50 ml). Ủ 800C trong 70%, ly tâm 13.000 vòng/phút trong 5 phút; 20 phút để giết tế bào nấm, sau đó hạ nhiệt loại bỏ dịch nổi và làm khô tủa. Hòa tan độ xuống nhiệt độ phòng. tủa trong 50 µl dịch TE. Bảo quản sản o - Bố sung 50 µl lysozyme nồng độ phẩm ở -20 C. 10 mg/ml (35 mg lysozyme trong nước * Thiết kế mồi và thực hiện phản ứng đến tổng số 3,5 ml) lắc xoáy (vortex), PCR: o ủ 37 C trong 1 giờ. Để thực hiện xác định loài các mẫu - Bổ sung 5 µl proteinase K nồng độ nấm, cặp mồi chung cho các loài nấm ký 10 mg/l và 70 µl SDS 10% (1 g SDS trong hiệu ITS1/ITS4 [3, 4], thiết kế để thực 9 ml nước), lắc xoáy nhẹ và ủ ở 65oC hiện phản ứng PCR vùng ITS (internal trong 10 phút. transcribed spacer). Bảng 1: Trình tự nucleotid các chuỗi mồi thực hiện PCR trong xác định loài nấm Candida spp. ’ ’ ITS1 18S rRNA TCCGTAGGTGAACCTGCGG 19 Khoảng 0.5 đến 0.9 kb (tùy loài nấm) vùng gen 18S rRNA-ITS1- ITS4 26S rRNA TCCTCCGCTTATTGATATGC 20 5.8S rRNA-ITS2-28S rRNA Phản ứng PCR thực hiện với cặp mồi, bao gồm mồi xuôi ITS1 và mồi ngược ITS4 cho sản phẩm từ 500 - 900 bp, tùy từng loài Candida sp. Thành phần phản ứng PCR như sau: * Thành phần phản ứng PCR: PCR master mix (Fermentas): 12,5 µl; ITS1F (10 picomol/ul): 1 µl; ITS4R (10 picomol/ul): 1 µl; DMSO: 1,25 µl; ADN khuôn: 1 µl; nước: 8,25 µl. - Chu trình nhiệt thực hiện PCR như sau: 61
4. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Bảng 2: Chu trình nhiệt thực hiện PCR. NJ (Neighbor-JoiningNJ) với hệ số tin tưởng 1.000 bootstrap [4]. * Địa điểm thực hiện: 950C 5’ 1 Tiến hành giải trình tự gen và xử lý số 950C 30” liệu tại Phòng Miễn dịch và Phòng Thí 0 58 C 30” 35 nghiệm Trọng điểm, Viện Công nghệ Sinh 720C 1’ học (Viện Hàn lâm Khoa học và Công 720C 5’ nghệ Việt Nam). 40C Nhiệt độ bảo quản sản phẩm KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Sau khi thực hiện phản ứng, kết quả 1. Kết quả tách chiết ADN tổng số PCR được kiểm tra bằng điện di sản từ các mẫu nấm nuôi cấy. phẩm trên thạch agarose 1%, hiệu điện thế U = 100 V trong 25 phút. Từ 106 mẫu nấm (phần lớn tập trung thuộc chi Candida spp.), sử dụng các loại * Giải trình tự và xử lý số liệu: dung môi, hóa chất pha chế theo mô tả Sản phẩm PCR sau khi kiểm tra được trên. Kiểm tra ngẫu nhiên ADN tổng số ở tinh sạch bằng phương pháp thôi gel một số mẫu, kết quả cho thấy có hiển thị (ADN elution) sử dụng bộ kít AccuPrep™ vệt sáng trên thạch agarose 1% nhuộm Gel Purification Kit (Bioneer, Hàn Quốc). ethidium bromide, chứng tỏ trong mẫu Nếu mẫu có 2 băng ADN sản phẩm PCR, tách chiết có ADN thu nhận từ hệ gen của tiến hành thôi gel mỗi băng ADN riêng rẽ mẫu nấm nuôi cấy. Từ kết quả tách chiết, và thu từng băng để giải trình tự. Sản phẩm PCR sau khi tinh sạch được giải sử dụng lần lượt ADN tổng số các mẫu trình tự trực tiếp, sử dụng mồi ITS1. sử dụng làm khuôn để thực hiện PCR theo quy trình đã mô tả [3, 4]. Kết quả Xử lý trình tự các chuỗi nucleotid bằng như sau: phần mềm chuyên biệt, bao gồm SeqEd1.03, AsemblyLIGNv1.9c và hệ chương trình Bảng 3: Số lượng sản phẩm PCR ITS1 - MacVector8.2 (Accelrys Inc) trên máy ITS4 trước và sau khi cắt bằng Msp I. tính Macintosh. So sánh đối chiếu và xử lý số liệu các chuỗi thu nhận và Candida sp. Ngân hàng Gen (Genbank) bằng chương trình GENEDOC2.7. So sánh trình tự 871 557,314 C. glabrata 49 49,4 nucleotid vùng ITS của các chủng nấm 535 297,238 C. albicans 27 27,3 Candida spp về thành phần nucleotid, xác định loài bằng cách truy cập Ngân hàng 524 340,184 C. tropical 10 10,1 Gen (BLAST: 520 520,000 C. parapsilosis 7 7,1 Blast.cgi) và xem xét mối quan hệ phả 510 261,249 C. krusei 6 6,1 hệ nguồn gốc, sử dụng chương trình Tổng 99 100,0 MEGA5.0 phương pháp “kết nối liền kề” 62
5. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Bảng 4: Tổng hợp kết quả (+) với ITS1 và ITS4 PCR. Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) Số mẫu (-) Tỷ lệ (%) Liên Vị (1) 35 29 82,9 6 17,1 Hoàng Tân (2) 47 44 93,6 3 6,4 Sông Khoai (3) 24 22 91,7 2 8,3 Chung 106 95 89,6 11 10,4 Giá trị p (1, 2, 3) < 0,05 89,6% phát hiện nấm (+) bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi chung ITS1 và ITS4. Có sự khác biệt giữa tỷ lệ phát hiện nấm ở 3 xã Liên Vị, Hoàng Tân và Sông Khoai tương ứng 82,9% so với 93,6% và 91,7%, p < 0,05. 2. Kết quả giải trình tự phân tích Có 106 mẫu được tách chiết ADN tổng chuỗi gen và giám định loài nấm gây số, thực hiện PCR, kết quả 11 mẫu âm nhiễm. tính không cho sản phẩm. Tổng số thu * Một số nhận xét chung: hoạch được 95 mẫu có sản phẩm PCR, trong đó, 4 mẫu cho sản phẩm kép, gồm Tất cả sản phẩm PCR thu được ở mỗi 2 băng ADN (0.5 kb và 0.9 kb). nhóm, kể cả một số sản phẩm thu được sau PCR lần 2, tinh sạch thu đơn băng Hầu hết sản phẩm thæi gel các mẫu ADN bằng phương pháp thôi gel (ADN được giải trình tự trực tiếp. Sau khi phân elution). Trường hợp đơn băng thì cắt tích, thu được 51 chuỗi nucleotid đơn nhất riêng băng ADN đó, trong trường hợp đa sử dụng để truy cập Ngân hàng Gen và băng, cắt riêng từng băng một và thu phân tích giám định loài. ADN tinh sạch vào từng ống để đưa đi Một số sản phẩm PCR khi giải trình tự giải trình tự. Sau khi giải trình tự, chuỗi cho 2 chuỗi nucleotid lồng nhau, không nucleotid được xử lý phân tích bằng phần thể phân tích để thu chuỗi nucleotid riêng mềm chuyên biệt để có chuỗi cuối cùng biệt. Như vậy, tuy cùng kích thước, nhưng và tiến hành truy cập Ngân hàng Gen sản phẩm là ADN của 2 hoặc đa loài gây sử dụng chương trình BLAST (BLAST: nhiễm. Với trường hợp này, cần tách dòng Danh phân biệt để thu từng clon riêng và giải sách mẫu, kết quả PCR, chuỗi gen giải trình tự. trình tự, kết quả truy cập Ngân hàng Gen Kết quả truy cập Ngân hàng Gen chủ và xác định kết quả cuối cùng được thống yếu là liệt kê xác định 5 loài trong số 51 kê ở bảng 4. mẫu truy cập, kết quả như sau: 63
6. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 - So sánh phân tích chuỗi gen ITS các mẫu thuộc loài Candida albicans. 20 40 60 80 Calb-IST(5 : GTGTTTTTCTTTGAAACAAACTTGCTTTGGCGGTCCCAGCCTGCCGCCAGAGGTCTAAACTTACAACCAATTTTTTA : 80 Calb-IST(5 : ... .. : 80 M1-H1- 030 : ... .. : 80 M2- H2-003 : ... .. : 80 M-H2- 052 : ... .. : 80 M-H2- 055 : ... .. : 80 M-H3-064 : ... .. : 80 M-S-061 : ... .. : 80 M-S-072 : ... .. : 80 M-S-130 : ... .. : 80 M-S-150 : ... .. : 80 M-S-161 : ... .. : 80 M-L-Đông-107 : ... .. : 80 M-L-Hàn-074 : ... .. : 80 M-L-Bầu-044 : ... .. : 80 M-L- Đình-121 : ... .. : 80 M-L-Quán-198 : ... .. : 80 100 120 140 160 Calb-IST(5 : TCAACTTGTCACACCAGATTATTACT-AATAGTCAAAACTTTCAACAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAAC : 159 Calb-IST(5 : ... .. : 159 M1-H1- 030 : ... .. : 159 M2- H2-003 : ... .. : 159 M-H2- 052 : ... .. : 159 M-H2- 055 : ... .. : 159 M-H3-064 : ... .. : 159 M-S-061 : ... .. : 159 M-S-072 : ... .. : 159 M-S-130 : ... .. : 159 M-S-150 : ... .. : 159 M-S-161 : ... .. : 159 M-L-Đông-107 : ... .. : 159 M-L-Hàn-074 : ... .. : 159 M-L-Bầu-044 : ... .. : 159 M-L- Đình-121 : ... .. : 159 M-L-Quán-198 : ... .. : 159 180 200 220 240 Calb-IST(5 : GCAGCGAAATGCGATACGTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGT : 239 Calb-IST(5 : ... .. : 239 M1-H1- 030 : ... .. : 239 M2- H2-003 : ... .. : 239 M-H2- 052 : ... .. : 239 M-H2- 055 : ... .. : 239 M-H3-064 : ... .. : 239 M-S-061 : ... .. : 239 M-S-072 : ... .. : 239 M-S-130 : ... .. : 239 M-S-150 : ... .. : 239 M-S-161 : : 239 M-L-Đông-107 : ... .. : 239 M-L-Hàn-074 : ... .. : 239 M-L-Bầu-044: : ... .. : 239 M-L- Đình-121 : ... .. : 239 M-L-Quán-198 : ... .. : 239 260 280 300 320 Calb-IST(5 : ATTCCGGAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCTCCCTCAAACCGCTGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGACTTGGGTTT : 319 Calb-IST(5 : ... .. : 319 M1-H1- 030 : ... .. : 319 M2- H2-003 : ... .. : 319 M-H2- 052 : ... .. : 319 M-H2- 055 : ... .. : 319 M-H3-064 : ... .. : 319 M-S-061 : ... .. : 319 M-S-072 : ... .. : 319 M-S-130 : ... .. : 319 M-S-150 : ... .. : 319 M-S-161 : ... .. : 319 M-L-Đông-107 : ... .. : 319 M-L-Hàn-074 : ... .. : 319 M-L-Bầu-044 : ... .. : 319 M-L- Đình-121 : : 319 M-L-Quán-198 : ... .. : 319 64
7. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 340 360 380 400 Calb-IST(5 : GCTTGAAAGACGGTAGTGGTAAGGCGGGATCGCTTTGACAATGGCTTAGGTCTAACCAAAAACATTGCTTGCGGCGGTAA : 399 Calb-IST(5 : : 399 M1-H1- 030 : : 399 M2- H2-003 : : 399 M-H2- 052 : : 399 M-H2- 055 : : 399 M-H3-064 : : 399 M-S-061 : : 399 M-S-072 : : 399 M-S-130 : : 399 M-S-150 : : 399 M-S-161 : : 399 M-L-Đông-107 : : 399 M-L-Hàn-074 : : 399 M-L-Bầu-044 : : 399 M-L- Đình-121 : : 399 M-L-Quán-198 : : 399 420 440 460 Calb-IST(5 : CGTCCACCACGTATATCTTCAAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAG : 463 Calb-IST(5 : :463 M1-H1- 030 : :463 M2- H2-003 : :463 M-H2- 052 : :463 M-H2- 055 : :463 M-H3-064 : :463 M-S-061 : :463 M-S-072 : :463 M-S-130 : :463 M-S-150 : :463 :463 M-S-161 : :463 M-L-Đông-107 : :463 M-L-Hàn-074 : :463 M-L-Bầu-044 : :463 M-L- Đình-121 : :463 M-L-Quán-198 : :463 Hình 1: So sánh trình tự nucleotid chuỗi gen ITS của 15 chủng C. albicans từ các mẫu nghiên cứu với 2 chủng C. albicans của thế giới. Các chuỗi nucleotid của 15 mẫu Candida sp. nghiên cứu bao gồm H1-030, H2-003, H2-052, H2-055, H3-064, S-061, S-072, S-130, S-150, S-161, L-Đông-107, L-Hán-074, L-Bầu-044, L-Đình-121, L-Quán-198 được sắp xếp so sánh và phân tích thành phần nucleotid với 2 chuỗi C. albicans thu thập từ Ngân hàng Gen là C. albicans (Calb- ITS(571bp)ATCC-JX094781 từ ATCC; Calb-ITS(540bp)ICB954-BR-JX463266 tõ Brazil). Các chủng đã cho tỷ lệ đồng nhất đạt 99 - 100%. Như vậy, ngoài truy cập Ngân hàng Gen, kết quả phân tích chuỗi gen khẳng định có 15 mẫu nấm gây nhiễm của Việt Nam được xác định là C. albicans. - So sánh phân tích chuỗi gen ITS của các mẫu thuộc loài Candida glabrata: 20 40 60 80 100 Cglab-ITS( : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 Cglab-ITS ( : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M3-H1-052 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M4-H1-053 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M8-H2-008 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M9-H2-019 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M15-H2-062 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M20-H3-070 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M1-H3-016 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M6-H3-042 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M7-H3-046 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAT AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M16-H3-069 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M18-H3-073 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M21-H3-082 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M22-H3-083 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M2-S-007 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M8-S-082 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M10-S-096 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M15-S-122 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAC TTTCTCTGCTGCGAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M16-S-124 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M3-L-Đông171 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M4-L-Đông195 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M5-L-Hàn-073 M7- : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 L-Hàn-086 M10- : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 LBầu-072 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M12-LĐình-114 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATACTTTCTCTGCTGC GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M19-LQuán-003 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 M16-L-Bầu-54 M17- : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 L-Quán18 : TGATTTGTCTGAGCTCGGAGAGAGACATCTCTGGGGAGGACCAGTGTAGACACTCAGGAGGCTCCTAA AATAT TTTCTCTGCTGT GAATGCTATTTCTCCTGCC : 104 65
8. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 120 140 160 180 200 Cglab-ITS( : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 Cglab-ITS( : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M3-H1-052 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M4-H1-053 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M8-H2-008 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M9-H2-019 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M15-H2-062 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M20-H3-070 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M1-H3-016 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M6-H3-042 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M7-H3-046 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M16-H3-069 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M18-H3-073 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M21-H3-082 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M22-H3-083 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M2-S-007 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M8-S-082 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M10-S-096 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M15-S-122 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M16-S-124 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M3-L-Đông171 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M4-L-Đông195 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M5-L-Hàn-073 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M7-L-Hàn-086 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M10-LBầu-072 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M12-LĐình-114 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M19-LQuán-003 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M16-L-Bầu-54 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 M17-L-Quán18 : TGCGCTTAAGTGCGCGGTTGGTGGGTGTTCTGCAGTGGGGGGAGGGAGCCGACAAAGACCTGGGAGTGTGCGTGGATCTCTCTATTCCAAAGGAGGTGTTTTAT : 208 220 240 260 280 300 Cglab-ITS( Cglab- : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 ITS( : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M3-H1-052 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M4-H1-053 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M8-H2-008 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA A GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M9-H2-019 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M15-H2-062 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M20-H3-070 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M1-H3-016 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M6-H3-042 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M7-H3-046 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M16-H3-069 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG G AGTTCTCCC : 312 M18-H3-073 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M21-H3-082 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M22-H3-083 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA A GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M2-S-007 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M8-S-082 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M10-S-096 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M15-S-122 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M16-S-124 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M3-L-Đông171 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA A GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M4-L-Đông195 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M5-L-Hàn-073 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M7-L-Hàn-086 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M10-LBầu-072 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M12-LĐình-114 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M19-LQuán-003 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M16-L-Bầu-54 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 M17-L-Quán18 : CACACGACTCGACACTTTCTAATTACTACACACAGTGGAGTTTACTTTACTACTATTCTTTTGTTCGTTGGGGGAA C GCTCTCTTTCGGGGGGG - AGTTCTCCC : 311 320 340 360 380 400 Cglab-ITS( Cglab- : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 ITS( : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M3-H1-052 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M4-H1-053 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M8-H2-008 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M9-H2-019 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA ATAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M15-H2-062 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M20-H3-070 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M1-H3-016 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M6-H3-042 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M7-H3-046 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M16-H3-069 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M18-H3-073 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M21-H3-082 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M22-H3-083 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT TTATTTAAA CTAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAAT AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 415 M2-S-007 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M8-S-082 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M10-S-096 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M15-S-122 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M16-S-124 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M3-L-Đông171 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M4-L-Đông195 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M5-L-Hàn-073 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT TTATTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 414 M7-L-Hàn-086 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M10-LBầu-072 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M12-LĐình-114 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M19-LQuán-003 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M16-L-Bầu-54 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 M17-L-Quán18 : AGTGGATGCAAACACAAACAAATATTTT - - - TTTAAA C TAATTCAGTCAACACAAGATTTCTTTTAGTAGAA - AACAACTTCAAAACTTTCAACAATGGATCTC : 411 420 440 460 480 500 520 66
9. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Cglab-ITS( : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 Cglab-ITS( : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M3-H1-052 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M4-H1-053 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M8-H2-008 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M9-H2-019 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M15-H2-062 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAAAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M20-H3-070 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M1-H3-016 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M6-H3-042 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M7-H3-046 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M16-H3-069 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M18-H3-073 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M21-H3-082 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M22-H3-083 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 519 M2-S-007 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M8-S-082 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M10-S-096 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M15-S-122 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M16-S-124 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M3-L-Đông171 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M4-L-Đông195 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M5-L-Hàn-073 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 518 M7-L-Hàn-086 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M10-LBầu-072 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M12-LĐình-114 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCATTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M19-LQuán-003 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M16-L-Bầu-54 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 M17-L-Quán18 : TTGGTTCTCGCATCGAGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACAT TGCGCCCTCTGGT : 515 540 560 480 600 620 Cglab-ITS( : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 Cglab-ITS( : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M3-H1-052 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M4-H1-053 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M8-H2-008 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M9-H2-019 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M15-H2-062 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M20-H3-070 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M1-H3-016 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M6-H3-042 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M7-H3-046 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M16-H3-069 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M18-H3-073 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M21-H3-082 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M22-H3-083 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 623 M2-S-007 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M8-S-082 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M10-S-096 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M15-S-122 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M16-S-124 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M3-L-Đông171 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M4-L-Đông195 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M5-L-Hàn-073 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACATTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 622 M7-L-Hàn-086 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M10-LBầu-072 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M12-LĐình-114 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M19-LQuán-003 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M16-L-Bầu-54 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 M17-L-Quán18 : ATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTCTCAAACACGTTGTGTTTGGTAGTGAGTGATACTCTCGTTTTTGAGTTAACTTGAAATTGTAGGCCA : 619 640 660 680 700 720 Cglab-ITS( Cglab- : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 ITS( : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M3-H1-052 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M4-H1-053 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M8-H2-008 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M9-H2-019 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M15-H2-062 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M20-H3-070 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M1-H3-016 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M6-H3-042 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M7-H3-046 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M16-H3-069 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M18-H3-073 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 727 M21-H3-082 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M22-H3-083 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M2-S-007 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M8-S-082 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M10-S-096 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M15-S-122 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M16-S-124 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M3-L-Đông171 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M4-L-Đông195 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M5-L-Hàn-073 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 726 M7-L-Hàn-086 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M10-LBầu-072 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M12-LĐình-114 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M19-LQuán-003 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M16-L-Bầu-54 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 M17-L-Quán18 : TATCAGTATGTGGGACACGAGCGCAAGCTTCTCTATTAATCTGCTGCTCGTTTGCGCGAGCGGCGGGGGTTAATACTGTATTAGGTTTTACCAACTCGGTGTTG : 723 740 760 780 800 820 Cglab-ITS( : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 Cglab-ITS( : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M3-H1-052 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M4-H1-053 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M8-H2-008 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M9-H2-019 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M15-H2-062 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M20-H3-070 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M1-H3-016 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M6-H3-042 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M7-H3-046 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M16-H3-069 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M18-H3-073 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M21-H3-082 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M22-H3-083 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M2-S-007 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M8-S-082 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M10-S-096 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M15-S-122 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M16-S-124 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M3-L-Đông171 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M4-L-Đông195 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M5-L-Hàn-073 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M7-L-Hàn-086 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M10-LBầu-072 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M12-LĐình-114 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M19-LQuán-003 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M16-L-Bầu-54 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 M17-L-Quán18 : ATCTAGGGAGGGATAAGTGATGTTTTGTGCGTGCTGGGCAGACAGACGTCTTTAAGTTTGACCTCAAATCAGGTAGGGTTACCCGCTGAACTTAAG : 8 2 0 Hình 2: So sánh trình tự nucleotid chuỗi gen ITS của 27 chủng C. glabrata (Việt Nam) với 2 chủng C. glabrata của thế giới. 67
10. TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2014 Các chủng cho tỷ lệ đồng nhất đạt cao (98 - 100%). Xác định các chuỗi nucleotid của 27 mẫu Candida sp. ở Việt Nam là C. glabrata, được sắp xếp so sánh và phân tích thành phần nucleotid với 2 chuỗi C. glabrata thu thập từ Ngân hàng Gen là C. glabrata (Cglab-ITS(886bp)-KW-FN652301 từ Cô-oét và Cglab-ITS (905bp)-GR-KC253980 từ Hy Lạp). Ngoài những sai khác mang tính chất đơn lẻ từng nucleotid, 2 chủng của mẫu nghiên cứu (các chủng H3-083 và L-Hàn-073) có sai khác đặc biệt đến 3 nucleotid (TTA) và đột biến điểm thêm vào 1 nucleotid G hoặc T tại vị trí giải trình tự gen. Như vậy, ngoài truy cập Ngân hàng Gen, kết quả phân tích chuỗi gen đã khẳng định 27 mẫu nấm gây nhiễm nghiên cứu được xác định là C. glabrata. - So sánh phân tích chuỗi gen ITS của các mẫu thuộc loài Candida tropicalis: 20 40 60 80 Ctrop-CN(5 : TGCTTAATTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :97 Ctrop-TW(4 : - GCTTA - TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :95 Ctrop-PK(5 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M11-H2-030 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M12-H3-061 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M9 - S-084 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M12- S-103 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M17- S-129 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 M21- S-157 : TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 TGCTTA – TTGCACCACATGTGTTTTTTATTGAACAAATTTCTTTGGTGGCGGGAGCAATCCTACCGCCAGAGGTTATAACTAAACCAAACTTTTTAT :96 100 120 140 160 180 Ctrop-CN(5 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :194 Ctrop-TW(4 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :192 Ctrop-PK(5 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M11-H2-030 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M12-H3-061 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M9 - S-084 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M12- S-103 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M17- S-129 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 M21- S-157 : TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 TTACAGTCAAACTTGATTTATTATTACAATAGTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAC :193 200 220 240 260 280 Ctrop-CN(5 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :291 Ctrop-TW(4 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :289 Ctrop-PK(5 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M11-H2-030 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M12-H3-061 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M9 - S-084 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M12- S-103 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M17- S-129 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 M21- S-157 : GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 GTAATATGAATTGCAGATATTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGGTATTCCAAAGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTC :290 300 320 340 360 380 Ctrop-CN(5 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :388 Ctrop-TW(4 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :385 Ctrop-PK(5 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M11-H2-030 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M12-H3-061 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M9 - S-084 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M12- S-103 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M17- S-129 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 M21- S-157 : TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 TCCCTCAAACCCCCGGGTTTGGTGTTGAGCAATACGCTAGGTTTGTTTGAAAGAATTTAACGTGGAAACTTATTTTAAGCGACTTAGGTTTATCCAA :387 400 420 440 460 Ctrop-CN(5 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 474 Ctrop-TW(4 : AA - CGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 470 Ctrop-PK(5 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 M11-H2-030 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 M12-H3-061 AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 :M9 - S-084 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 M12- S-103 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 M17- S-129 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 M21- S-157 : AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 AAACGCTTATTTTGCTAGTGGCCACCACAATTTATTTCATAACTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT : 473 Hình.3: So sánh trình tự nucleotid chuỗi gen ITS của 6 chủng C. tropicalis các mẫu nghiên cứu với 3 chủng C. tropicalis của thế giới. 68