Phát hiện đột biến xóa đoạn gen Cyp21a2 gây bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - Hydroxylase

Nội dung text: Phát hiện đột biến xóa đoạn gen Cyp21a2 gây bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu 21 - Hydroxylase

1. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN XÓA ĐOẠN GEN CYP21A2 GÂY BỆNH TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH THỂ THIẾU 21 - HYDROXYLASE Vũ Chí Dũng, Trần Huy Thịnh, Tạ Thành Văn, Trần Vân Khánh Trường Đại học Y Hà Nội Tăng sản thượng thận bẩm sinh do thiếu hụt enzym 21- hydroxylase là bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể thường gây nên do đột biến gen CYP21A2. Đột biến điểm là loại đột biến phổ biến nhất, chiếm tỉ lệ khoảng 70 - 75%, đột biến xóa đoạn chiếm tỉ lệ thấp hơn khoảng 20 - 25%. Ở Việt Nam, chưa có nghiên cứu toàn diện nào tiến hành xác định đột biến xóa đoạn trên gen CYP21A2 ở bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh. Vì vậy nghiên cứu này được thực hiện nhằm xác định đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 trên bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu hụt enzym 21- hydroxylase. 56 bệnh nhân được chẩn đoán xác định bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu enzym 21 - hydroxylase được lựa chọn nghiên cứu. Kỹ thuật Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) kết hợp với giải trình tự gen được sử dụng để phát hiện đột biến. Kết quả cho thấy 14/56 (25%) bệnh nhân đã được phát hiện có đột biến xóa đoạn gen CYP21A2, trong đó, 10/14 bệnh nhân có đột biến xóa đoạn đồng hợp tử từ exon 1 đến exon 3, 1/14 bệnh nhân có đột biến xóa đoạn đồng hợp tử từ gen C4B đến exon 8 gen CYP21A2 và 3 bệnh nhân có đột biến xóa đoạn dị hợp tử exon 1 - 3 kết hợp với đột biến điểm 656A > G hoặc R356W. Từ khóa: tăng sản thượng thận bẩm sinh, đột biến xóa đoạn gen CYP21A2, MLPA I. ĐẶT VẤN ĐỀ Tăng sản thượng thận bẩm sinh thể thiếu này dẫn đến các trình tự ở vùng gen giả enzym 21 - hydroxylase (21 - OH) là bệnh di (CYP21A1P) sẽ chuyển sang gen CYP21A2 truyền lặn trên nhiễm sắc thể số 6. Bệnh gây và dẫn đến các đột biến gây bệnh [3; 4]. nên do đột biến gen CYP21A2 làm rối loạn Cho đến nay, nhiều dạng đột biến đã được quá trình sinh tổng hợp hormon vỏ thượng phát hiện như đột biến điểm, đột biến xóa thận, gây bệnh cảnh lâm sàng là cơn suy đoạn, trong đó đột biến điểm chiếm tỉ lệ cao thượng thận cấp hoặc nam hóa ở trẻ gái, dậy nhất khoảng 70 - 75%, đột biến xóa đoạn thì sớm giả ở trẻ trai [1, 2]. chiếm tỉ lệ thấp hơn khoảng 20 - 25% [4; 5; 6]. Gen CYP21A2 mã hóa cho 21 - OH nằm Kỹ thuật giải trình tự thường được áp dụng để trên cánh ngắn nhiễm sắc thể số 6 (6p21.3), xác định đột biến điểm gen CYP21A2 [4; 5; 6; gồm 10 exon, có kích thước 3.4 kb. Đột biến 9]. Với đột biến xóa đoạn, có nhiều kỹ thuật gây thiếu hụt 21 - OH là do sự bắt chéo không xác định, tuy nhiên các phương pháp kinh đồng đều giữa các cặp nhiễm sắc thể trong điển như PCR thường bị hạn chế về mặt thời quá trình phân bào giảm nhiễm. Sự bắt chéo gian, kỹ thuật MLPA là kỹ thuật xác định đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 nhanh chóng, chính xác và đang được ứng dụng rộng rãi [7, Địa chỉ liên hệ: Trần Vân Khánh, Trung tâm Gen - Protein, 8]. Đề tài được thực hiện với mục tiêu: Xác Trường Đại học Y Hà Nội định đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 trên Email: vankhanh73md@yahoo.com Ngày nhận: 16/11/2015 bệnh nhân tăng sản thượng thận bẩm sinh thể Ngày được chấp thuận: 26/02/2016 thiếu hụt enzym 21-hydroxylase. 8 TCNCYH 99 (1) - 2016
2. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 2oC trước khi cho 3µl hỗn hợp chứa các đoạn oligonucleotid của các probe. Hỗn hợp được ủ 1. Đối tượng: 56 bệnh nhân tăng sản ở 60oC trong 16 giờ. Thêm 32µl hỗn hợp thượng thận bẩm sinh thể thiếu enzym 21 - ligase buffer, ủ ở 54oC trong 15 phút. Tăng hydroxylase được chẩn đoán và điều trị tại nhiệt độ lên 98oC trong 5 phút, giữ ở 4oC. Khoa Nội tiết - Chuyển hóa - Di truyền, Bệnh Khuếch đại sản phẩm lai: Thêm 10µl sản viện Nhi Trung ương. phẩm lai vào 30µl hỗn hợp PCR buffer, giữ ở 60oC trước khi thêm 10µl hỗn hợp PCR Tiêu chuẩn chẩn đoán master vào hỗn hợp, thực hiện chu trình nhiệt Bệnh nhân có biểu hiện mất muối, mất sau: [95oC - 30 giây, 60oC - 30 giây, 72oC - 1 + + nước từ nhẹ đến nặng, Na giảm và K tăng; phút] x 35 chu kỳ; 72oC - 20 phút; bảo quản ở Biểu hiện mơ hồ giới tính sau sinh ở trẻ gái và 4oC. Điện di mao quản huỳnh quang trên máy dậy thì sớm ở trẻ trai. Nồng độ 17 - OH tăng giải trình tự để phân tích kết quả. Nếu có đột trên 10.000 ng/dl ở thể cổ điển và tăng từ 200- biến xóa đoạn, probe không gắn được vào 10.000 ng/dl ở thể không cổ điển [2]. gen đích, do đó kết quả điện di sẽ không xuất 2. Phương pháp hiện đỉnh tương ứng tại exon đột biến. Đột biến dị hợp tử thì chiều cao đỉnh sẽ bằng 1/2 2.1. Kỹ thuật tách chiết DNA so với mẫu đối chứng. DNA được tách chiết từ bạch cầu máu 3. Kỹ thuật giải trình tự gen: được tiến ngoại vi theo quy trình phenol/chloroform. Tất hành theo quy trình đã mô tả trước đây [9]. cả các mẫu DNA sẽ được tiến hành đo nồng độ và độ tinh sạch, chỉ có mẫu DNA đạt giá trị 4. Đạo đức nghiên cứu 1,8-2,0 mới đạt yêu cầu về tinh sạch và được Nghiên cứu tuân thủ tuyệt đối các quy định sử dụng để phân tích. về đạo đức trong nghiên cứu y sinh. Bệnh 2.2. Kỹ thuật MLPA nhân hoàn toàn tự nguyện tham gia vào Sử dụng kit MLPA P050B2 (MRC - Hol- nghiên cứu. Bệnh nhân hoàn toàn có quyền land). Thành phần của kit gồm các đầu dò rút lui khỏi nghiên cứu khi không đồng ý tiếp (probe) để khuyếch đại gen CYP21A2, mỗi tục tham gia vào nghiên cứu. Bệnh nhân sẽ đầu dò tương ứng với một vùng gen. Ngoài được thông báo về kết quả xét nghiệm gen để ra, còn có các đầu dò đặc trưng cho gen của giúp cho các bác sỹ tư vấn di truyền hoặc lựa người cũng được sử dụng để làm đối chứng chọn phác đồ điều trị phù hợp. Các thông tin và 2 đầu dò cho nhiễm sắc thể X và Y để xác cá nhân được đảm bảo bí mật. định giới tính. Sản phẩm khuếch đại sẽ được III. KẾT QUẢ điện di mao quản trên máy giải trình tự. Số lượng sản phẩm khuếch đại của mỗi đầu dò Bằng kỹ thuật MLPA kết hợp với giải trình sẽ tỷ lệ thuận với số bản copy của đoạn DNA tự gen, 14/56(25%) bệnh nhân đã được phát đích đặc hiệu với đầu dò đó. hiện là có đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 trong đó: Quy trình MLPA 10/14 bệnh nhân có đột biến xóa đoạn Cho 5µl DNA vào 1 ống PCR, biến tính ở đồng hợp tử exon 1 đến exon 3 (exon1-3 o 98 C trong 5 phút. Nhiệt độ được chuyển về deletion). TCNCYH 99 (1) - 2016 9
3. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC 1 bệnh nhân có đột biến xóa đoạn đồng exon 1 đến exon 3 kết hợp đột biến điểm hợp tử từ gen C4B đến exon 8 gen CYP21A2 656A > G và 1 bệnh nhân có đột biến xóa (C4B - exon 8 deletion). đoạn dị hợp tử exon 1 đến exon 3 kết hợp đột 2 bệnh nhân có đột biến dị hợp tử xóa đoạn biến điểm R356W trên gen CYP21A2. Bảng 1. Kết quả phát hiện đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 của bệnh nhân Thể bệnh 21 - OH n Allele 1 Allele 2 Kiểu gen Mất muối 0% 10 Exon 1 - 3 deletion Exon 1 - 3 deletion Homozygous Nam hóa 3% 1 Exon 1 - 3 deletion 656A > G Heterozygous Mất muối 0% 1 Exon 1 - 3 deletion 656A > G Heterozygous Mất muối 0% 1 Exon 1 - 3 deletion R356W Heterozygous Mất muối 0% 1 C4B - exon 8 deletion C4B-exon 8 deletion Homozygous Tổng số 14 bệnh nhân Bảng 1 cho thấy, các bệnh nhân có đột Kết quả trên cho thấy, bệnh nhân mã số 01 biến xóa đoạn đồng hợp tử từ exon 1 đến không thấy xuất hiện các đỉnh tương ứng với exon 3 và từ gen C4B đến exon gen exon 1 đến exon 3, vì vậy, bệnh nhân có đột CYP21A2 đều được chẩn đoán là thể bệnh biến xóa đoạn từ exon 1 đến exon 3. Tương mất muối. Bên cạnh đó có 2 bệnh nhân có đột tự ở bệnh nhân mã số 08 không thấy xuất biến dị hợp tử xóa đoạn exon 1 đến exon 3 hiện các đỉnh của gen C4B và các exon 1, 3, kết hợp đột biến điểm 656A > G hoặc R356W 4, 6, 8 của gen CYP21A2 vì vậy bệnh nhân có cũng được chẩn đoán là thể mất muối. Thể đột biến xóa đoạn đồng hợp tử từ gen C4B mất muối là thể bệnh nặng, biểu hiện bệnh đến exon 8 trên gen CYP21A2 (hình 1). sớm nên các bệnh nhân này hầu hết đều Kết quả hình 2 cho thấy bệnh nhân mã số được chẩn đoán ở thời điểm từ 2-6 tuần và 03 có xuất hiện các đỉnh tương ứng với exon enzym 21 - OH không được tổng hợp (21 - 1 đến exon 3, tuy nhiên chiều cao đỉnh của OH: 0%). Duy nhất có 1 bệnh nhân có đột exon 1 và exon 3 của bệnh nhân này chỉ bằng biến xóa đoạn dị hợp tử exon 1 đến exon 3 1/2 so với mẫu đối chứng của người bình kết hợp đột biến điểm 656A > G được chẩn thường, chứng tỏ bệnh nhân có đột biến xóa đoán là thể nam hóa đơn thuần. Thể nam hóa đoạn dị hợp tử exon 1 đến exon 3. Tiến hành đơn thuần là thể bệnh nhẹ hơn nên biểu hiện giải trình tự toàn bộ gen CYP21A2 phát hiện bệnh muộn hơn và bệnh nhân này có hoạt độ thấy bệnh nhân có đột biến dị hợp tử 656A enzym 21 - OH là 3%. > G kết hợp. 10 TCNCYH 99 (1) - 2016
4. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết quả bệnh nhân có đột biến xóa đoạn đồng hợp tử gen CYP21A2 Hình 1. Kết quả đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 Ex1, Ex3, Ex4, Ex6, Ex8, là các đỉnh tương ứng với vị trí exon 1, 3, 4, 6, 8 của gen CYP21A2; E1P, I2P, E10P là các đỉnh tương ứng với vị trí exon 1, intron2, và exon 10 của gen giả CYP21A1P; C4A, C4B là đỉnh tương ứng với gen C4A, C4B; Y là đỉnh tương ứng với NST Y dùng để xác định giới tính. (1) Là hình ảnh tương ứng với kết quả người bình thường, (2) Là hình ảnh tương ứng với kết quả của bệnh nhân mã số 01 bị xóa đoạn exon 1 đến exon 3, (3) Là hình ảnh tương ứng với kết quả của bệnh nhân mã số 08 bị đột biến xóa đoạn từ gen C4B đến exon 8 gen CYP21A2. TCNCYH 99 (1) - 2016 11
5. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Kết quả bệnh nhân có đột biến xóa đoạn dị hợp tử gen CYP21A2 kết hợp với đột biến điểm Ex3 Ex1 A)A NgNgườười bbìnhình ththưườờngng BBệệnh nhân Ex3 Ex1 656656AA 656A > G BB) 656A>G NgNgườườii bìbìnhnh ththưườờngng BBệệnh nhân Hình 1. Kết quả xác định đột biến gen CYP21A2 (A) Kết quả MLPA: Ex1, Ex3, là các đỉnh tương ứng với vị trí exon 1, 3, của gen CYP21A2;(B) kết quả giải trình tự gen: mũi tên chỉ vị trí đột biến 656A > C. IV. BÀN LUẬN Nghiên cứu này đã sử dụng kỹ thuật MLPA đột biến xóa đoạn ở tất cả vị trí trên gen kết hợp với giải trình tự gen để xác định đột CYP21A2. Đây là ưu thế đặc biệt của MLPA biến xóa đoạn gen cho 56 bệnh nhân tăng sản mà các phương pháp kinh điển không có thượng thận bẩm sinh thể thiếu enzym được. Bằng kỹ thuật MLPA,14/56 (25%) bệnh 21 - OH, chỉ cần 1 phản ứng MLPA sẽ khuếch nhân đã được phát hiện đột biến xóa đoạn đại toàn bộ 10 exon của gen CYP21A2 [7; 8]. gen CYP21A2 với 4 dạng đột biến khác nhau, Như vậy, trong vòng 2 ngày có thể xác định trong đó đột biến xóa đoạn đồng hợp tử từ 12 TCNCYH 99 (1) - 2016
6. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC exon 1 đến exon 3 chiếm tỉ lệ cao nhất với nghiên cứu của chúng tôi với 11/14 bệnh nhân 10/14 trường hợp, còn lại đột biến xóa đoạn có đột biến đồng hợp tử xóa đoạn và 2/14 đồng hợp tử từ gen C4B đến exon 8 gen bệnh nhân có đột biến dị hợp tử xóa đoạn kết CYP21A2 chiếm tỉ lệ thấp với 1/14 trường hợp với đột biến điểm (656A > G hoặc hợp. Nghiên cứu cũng phát hiện được 3 bệnh R356W) đều được chẩn đoán là lâm sàng thể nhân có đột biến xóa đoạn dị hợp tử exon 1 mất muối. Sự phù hợp giữa kiểu gen và kiểu đến exon 3 kết hợp với đột biến điểm 656A > hình trong nghiên cứu này đóng vai trò đặc G hoặc R356W. Đột biến gen CYP21A2 đã biệt quan trọng trong thực hành lâm sàng được nghiên cứu rộng rãi ở nhiều nước trên chẩn đoán và điều trị bệnh tăng sản thượng thế giới, cho đến nay đã có hơn 150 đột biến thận bẩm sinh; đặc biệt với các trường hợp trẻ khác nhau đã được báo cáo [4 - 9]. Các đột được chẩn đoán lâm sàng sớm dựa vào sàng biến điểm hay gặp của gen CYP21A2 bao lọc sơ sinh; hoặc trong các trường hợp xét gồm 656 A/C > G, I172N, R356W và đột biến nghiệm hormon không rõ ràng. Trong khi các xóa đoạn với các tỷ lệ khác nhau tùy từng biểu hiện mất muối chưa xuất hiện, kết quả chủng tộc. Trong nghiên cứu này, tỷ lệ phát phân tích gen CYP21A2 có giá trị định hướng hiện đột biến xóa đoạn tương tự với nhiều phân loại và chỉ định điều trị hormon thay thế nghiên cứu của các tác giả khác. Nghiên cứu hydrocortisone đơn thuần cho thể nam hóa của Huynh T và cộng sự trên bệnh nhân tăng đơn thuần hay kết hợp với hormon chuyển sản thượng thận bẩm sinh Úc đã phát hiện hóa muối nước fludrocortisone (Florinef) trong được 35,5% bệnh nhân có đột biến xóa đoạn thể mất muối. Tuy nhiên, chúng tôi phát hiện [11]. Theo các nghiên cứu khác tại châu Âu và thấy 1 trường hợp bệnh nhân có đột biến xóa châu Mỹ, tỉ lệ bệnh nhân có đột biến xóa đoạn đoạn dị hợp tử kết hợp với 656A > G là thể 30kb khoảng 20 - 25% được phát hiện ở bệnh nam hóa đơn thuần, trường hợp bệnh nhân nhân thể mất muối [4]. Trong nghiên cứu này, này không có sự tương xứng giữa kiểu gen và tỷ lệ gặp đột biến xóa đoạn có cao hơn so với kiểu hình, để hiểu rõ hơn cơ chế chúng tôi cần một số quốc gia khác. Một nghiên cứu ở thêm thời gian để theo dõi bệnh nhân và có Brazil, đã xét nghiệm gen cho 41 gia đình có những nghiên cứu sâu hơn. người bị bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh Những năm gần đây, ngày càng nhiều thể thiếu enzym 21 - OH nhận thấy tỷ lệ gặp nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật MLPA để xác dạng đột biến xóa đoạn là 8,1% [10], trong đó định các đột biến xóa đoạn lớn trên gen đột biến xóa đoạn 30kb được tìm thấy với tỷ lệ CYP21A2 thay thế cho kỹ thuật PCR hoặc thấp (4,5%) ở những bệnh nhân thể mất muối Southern blot [7; 8]. Việc phát hiện đột biến so với các nghiên cứu khác [5]. Tỷ lệ đột biến xóa đoạn gen CYP21A2 trên bệnh nhân tăng xóa đoạn được phát hiện thấp ở các quốc gia sản thượng thận bẩm sinh sẽ là bước khởi vùng châu Á như Nhật là 11,8%, Hồng Kong - đầu cho nghiên cứu tiếp theo để phát hiện đột Trung Quốc là 9,5% và Singapore (gốc Trung biến điểm trên những bệnh nhân còn lại. Kết Quốc, Ấn Độ, Malaysia) là 3,9% [12; 13]. Đột quả phát hiện đột biến gen không những đóng biến xóa đoạn lớn dẫn đến mất toàn bộ chức vai trò quan trọng để chẩn đoán xác định năng enzym do đó sẽ dẫn đến thể lâm sàng bệnh, điều trị sớm tránh biến chứng cho bệnh nặng là thể cổ điển mất muối [3; 6]. Điều này nhân mà nó còn là cơ sở quan trọng để phát phù hợp với hầu hết các bệnh nhân trong hiện người lành mang gen bệnh và chẩn đoán TCNCYH 99 (1) - 2016 13
7. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC trước sinh cho các thành viên trong gia đình, 3. White PC, Speiser PW. (2000). đặc biệt những gia đình có một con bị bệnh Congenital adrenal hyperplasia due to 21- nếu họ có kế hoạch tiếp tục sinh con thứ 2 hydroxylase deficiency. Endocr Rev, 21 (3), [14]. Kết quả chẩn đoán trước sinh sẽ tránh 245 - 291. sinh ra một đứa trẻ bị bệnh hoặc có kế hoạch 4. Finkielstain GP., Chen W., Mehta SP điều trị sớm cho các bệnh nhân được chẩn (2011). Comprehensive genetic analysis of đoán sớm từ thời kỳ bào thai. 182 unrelated families with congenital adrenal hyperplasia due to 21 - hydroxylase deficiency.J V. KẾT LUẬN Clin Endocrinol Metab, 96 (1), 161 - 172. 14/56 (25%) bệnh nhân đã được phát hiện 5. Satomi.K, Takio.T (2002). Genetic Ana- có đột biến xóa đoạn đồng hợp tử hoặc xóa lysis of Japanese Patients with 21- hydroxyla- đoạn dị hợp tử gen kết hợp với đột biến điểm se deficiency: Identification of a patient with a trên CYP21A2, trong đó đột biến xóa đoạn new mutation of a homozygous deletion of đồng hợp tử exon 1 đến exon 3 chiếm tỉ lệ cao adenine at codon 246 and patients without với 10/14 bệnh nhân, tiếp theo là đột biến xóa demonstrable mutation within the structural đoạn đồng hợp tử từ gen C4B đến exon 8 gen gene for CYP21. The Journal of clinical Endo- CYP21A2 chiếm tỉ lệ thấp với 1/14 bệnh nhân, crinology & Metabolism, 87(6), 2668 - 2673. 3/14 bệnh nhân với đột biến xóa đoạn dị hợp 6. Wilson RC, Nimkarn S, Dumic M et al tử kết hợp với đột biến điểm. (2007). Ethnic specific distribution of mutations in 716 patients with congenital adrenal hyper- Lời cám ơn plasia owing to 21 - Hydroxylase deficiency. Nghiên cứu được thực hiện với sự hỗ trợ Mol Genet.Meta, 90(4), 414 - 421. kinh phí bởi đề tài cấp Bộ Y tế: “Nghiên cứu 7. Concolino P, Mello E, Toscano V quy trình phát hiện người mang gen bệnh và (2009). Multiplex ligation-dependent probe chẩn đoán trước sinh bệnh tăng sản thượng amplification (MLPA) assay for the detection of thận bẩm sinh bằng kỹ thuật sinh học phân tử” CYP21A2 gene deletions/duplications in và sự giúp đỡ của các cán bộ của Trung tâm congenital adrenal hyperplasia: first technical nghiên cứu Gen- Protein, Bộ môn Nhi, Trường report. Clin Chim Acta, 402 (1 - 2), 164 - 170. Đại học Y Hà Nội; Khoa Nội tiết - Chuyển hóa 8. Jang JH, Jin DK, Kim JH (2011). - Di truyền, Bệnh viện Nhi Trung ương. Multiplex ligation - dependent probe amplification assay for diagnosis of congenital TÀI LIỆU THAM KHẢO adrenal hyperplasia. Ann Clin Lab Sci, 41(1), 1. Angel.O.K Chan, But.M.W (2011). 44 - 47. Molecular analysis of congenital adrenal 9. Concolino P, Mello E, Zuppi C (2010). hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency Molecular diagnosis of congenital adrenal in Hong Kong Chinese patients. Steroids, 76, hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency: 1057 - 1062. an update of new CYP21A2 mutations. Clin 2. Saroj. N, New. M. I (2011). Congenital Chem Lab Med, 48(8), 1057 - 1062. adrenal hyperplasia due to 21 – hydroxylase 10. Fernanda B Coeli., Fernanda C deficiency. Annals of the New York academy Soardi (2010). Novel deletion alleles carrying of sciences, 1192, 5 - 11. CYP21A1P/A2 chimeric genes in Brazilian 14 TCNCYH 99 (1) - 2016
8. TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC patients with 21 - hydroxylase deficiency. BMC without demonstrable mutation within the medical Genetics. BMC Med Genet, 41(1), structural gene for CYP21. The Journal of 44 - 47. clinical Endocrinology & Metabolism, 87(6), 11. Huynh T, McGown I, Cowley D 2668 - 2673. (2009). The clinical and biochemical spectrum 13. Angel. O. K Chan, But.M.W (2011). of congenital adrenal hyperplasia secondary to Molecular analysis of congenital adrenal 21-hydroxylase deficiency. Clin Biochem Rev, hyperplasia due to 21- hydroxylase deficiency 30(2), 75 - 86. in Hong Kong Chinese patients. Steroids, 76, 12. Satomi.K, Takio.T et al (2002). Gene- 1057 - 1062. tic Analysis of Japanese Patients with 14. Juan Tian., Guohua Yang (2011). 21 - hydroxylase deficiency: Identification of a Molecular diagnosis of two families with clas- patient with a new mutation of a homozygous sic congenital adrenal hyperplasia. Gene, 5, deletion of adenine at codon 246 and patients 368 - 389. Summary DETECTION OF CYP21A2 GENE DELETION IN CONGENITAL ADRENAL HYPERPLASIA DUE TO 21 - HYDROXYLASE DEFICIENCY Congenital adrenal hyperplasia caused by 21 - hydroxylase deficiency (CAH - 21OH) is an autosomal recessive genetic disorder due to mutation in the CYP21A2 gene. Point mutation is the most common mutation in CYP21A2 and accounts for 70 - 75%. Deletion mutation is at a lower rate of 20 - 25%. In Vietnam, there has been not any report about deletion mutation in CYP21A2 gene of CAH - 21OH patients. The aim of this study was to determine deletion mutations of CYP21A2 gene in patients with CAH - 21OH. 56 CAH - 21OH patients were selected for this study; MLPA and sequencing techniques were used to identify mutation in CYP21A2 gene. The results showed that 14/56 (25%) patients were found to have mutation in CYP21A2 gene, of them all, 10 patients showed homozygous deletion from exon 1 to exon 3, 1 patient showed homozy- gous deletion from 4B gene to exon 8 of CYP21A2 gene and 3 patients carrying heterozygous deletion from exon 1 - 3 combined with point mutation 656A > G or R365W. Keywords: Congenital adrenal hyperplasia, CYP21A2 deletion mutation, MLPA TCNCYH 99 (1) - 2016 15