Kết quả bước đầu áp dụng quy trình chẩn đoán tiền làm tổ tại học viện quân y

Nội dung text: Kết quả bước đầu áp dụng quy trình chẩn đoán tiền làm tổ tại học viện quân y

1. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 KẾT QU Ả B ƯỚC ĐẦU ÁP D ỤNG QUY TRÌNH CH ẨN ĐOÁN TI ỀN LÀM T Ổ T ẠI H ỌC VI ỆN QUÂN Y Nguy ễn Đình T ảo*; Qu ản Hoàng Lâm*; Nguy ễn Thanh Tùng* Tr ần V ăn Khoa*; Tri ệu Ti ến Sang* TÓM T ẮT Mục tiêu: báo cáo kết qu ả b ước đầu áp d ụng quy trình ch ẩn đoán ti ền làm t ổ t ại H ọc vi ện Quân y. Đối t ượng và ph ươ ng pháp: 20 b ệnh nhân (BN) có con b ị m ắc b ệnh di truy ền ho ặc có ti ền s ử b ị đình ch ỉ thai vì b ệnh di truy ền, ti ến hành th ụ tinh ống nghi ệm, sinh thi ết phôi ch ẩn đoán di truy ền ti ền làm t ổ. Kết qu ả: 7 gia đình đã thành công sau khi chuy ển phôi, trong đó 2 gia đình có con b ị b ệnh teo c ơ tu ỷ (SMA), 5 gia đình có con b ị b ệnh thalassemia. Kết lu ận: đã thành công trong vi ệc xây d ựng quy trình ch ẩn đoán m ột s ố b ệnh di truy ền tr ước khi phôi cấy truy ền phôi v ới s ự thành công c ủa 7 gia đình. * T ừ khóa: Teo c ơ t ủy; Gen SMN; Thalassemia; Ch ẩn đoán di truy ền ti ền làm t ổ. Primary Results of Applying Protocol of Preimplantation Genetic Diagnosis in Military Medical University Summary Objectives: To report the primary results of applying protocol of preimplantation genetic diagnosis in Military Medical University. Subjects and methods: 20 patients who had their children with the genetic disease or history of suspended pregnancy for genetic diseases were conducted in vitro fertilization and embryo biopsy for preimplantation genetic diagnosis. Results: 7 families succeeded after embryo transfer, in which 2 families having children with SMA, 5 families having children with thalassemia. Conclusion: We have succeeded in building diagnostic procedures of some genetic diseases before embryo transfer with the success of 7 families. * Key words: Spinal muscular atrophy; SMN gene; Thalassemia; Preimplantation genetic diagnosis. ĐẶT V ẤN ĐỀ gi ảm ho ặc m ất, bi ến d ạng l ồng ng ực và cứng kh ớp. T ỷ l ệ b ệnh SMA chung trên Bệnh teo c ơ t ủy (Spinal muscular toàn th ế gi ới là 1/10.000 tr ẻ đẻ s ống và t ỷ l ệ atrophy - SMA ) là b ệnh th ần kinh c ơ, di ng ười mang gen b ệnh dao động t ừ 1/40 - truy ền l ặn do đột bi ến gen trên nhi ễm s ắc 1/60. Theo cách phân lo ại qu ốc t ế hi ện th ể th ường. B ệnh SMA đặc tr ưng b ởi thoái hành, SMA được chia thành ba th ể lâm hoá tu ần ti ến c ủa t ế bào s ừng tr ước tu ỷ sàng d ựa vào tu ổi kh ởi phát b ệnh và m ức sống, d ẫn đến y ếu c ơ đối x ứng g ốc chi, độ n ặng c ủa b ệnh: th ể n ặng, th ể v ừa và th ể tr ươ ng l ực c ơ và ph ản x ạ gân x ươ ng b ị nh ẹ t ươ ng đươ ng v ới SMA týp I, II và III [8]. * Học vi ện Quân y Ng ười ph ản h ồi (Corresponding): Nguy ễn Đình T ảo (dinhtao1955@yahoo.com) Ngày nh ận bài: 20/05/2016; Ngày ph ản bi ện đánh giá bài báo: 08/07/2016 Ngày bài báo được đă ng: 24/07/2016 13
2. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 Gen SMN bao g ồm 9 exon mã hoá cho phân t ử protein SMN dài 294 axít amin. Gen SMN c ả hai b ản sao gi ống nhau là gen SMNt (SMN1 ) và gen SMNc (SMN2 ). Hai gen này ch ỉ khác nhau ở 5 c ặp base: m ột c ặp ở intron 6, m ột c ặp ở exon 7, hai c ặp ở intron 7 và m ột c ặp ở exon 8. S ự khác nhau ở exon 7 và exon 8 được s ử d ụng để phân bi ệt gi ữa gen SMNt và SMNc trong ch ẩn đoán SMA. Ng ười bình th ường có c ả exon 7 c ủa gen SMNc và gen SMNt , đối v ới ng ười b ị SMA ch ỉ có exon 7 c ủa gen SMNc , s ự khác bi ệt ở v ị trí nucleotid 214 trên exon 7 gen SMNt là nucleotit C, còn exon 7 gen SMNc là nucleotit T. Hình 1 : S ự khác bi ệt gi ữa gen SMNt v ới SMNc. Sự khác nhau ở 1 nucleotid thu ộc cơ s ở c ủa ph ươ ng pháp ch ẩn đoán gen exon 7 gi ữa SMNt và SMNc , khi ến cho bệnh SMA. SMNt t ổng h ợp ra phân t ử protein SMN Mỗi tr ẻ em m ắc b ệnh SMA ra đời là đủ chi ều dài và có đủ ch ức n ăng, trong gánh n ặng cho gia đình v ề tâm lý và tài khi protein do SMNc t ổng h ợp có ch ức chính, đồng th ời c ũng là gánh n ặng cho năng r ất h ạn ch ế. toàn xã h ội. Do đó, vi ệc ch ẩn đoán di Có ba d ạng đột bi ến gen SMN gây truy ền tr ước chuy ển phôi (Preimplantation bệnh SMA g ồm: d ạng 1: đột bi ến m ất genetic diagnosis - PGD) v ới nh ững gia đồng h ợp toàn b ộ gen SMNt ho ặc ch ỉ m ất đình ti ểu s ử có ng ười m ắc b ệnh SMA đồng h ợp m ột ph ần gen SMNt ; d ạng 2: nh ằm ch ọn ra phôi lành để c ấy chuy ển đột bi ến chuy ển đổi gen SMNt thành vào t ử cung m ẹ, t ừ đó sinh ra em bé kh ỏe SMNc ; d ạng 3: đột bi ến điểm x ảy ra ở mạnh là c ần thi ết, có ý ngh ĩa khoa h ọc và gen SMNt của m ột nhi ễm s ắc th ể, gen th ực ti ễn, nhân v ăn cao c ả. SMNt trên nhi ễm s ắc th ể còn l ại trong c ặp Thalassemia là m ột trong nh ững b ệnh tươ ng đồng s ố 5 b ị đột bi ến d ạng 1 ho ặc 2. di truy ền đơ n gen ph ổ bi ến nh ất trên th ế Trong đó, kho ảng 95% BN SMA có gen gi ới. Ở Vi ệt Nam, ước tính có kho ảng SMNt bị đột bi ến thu ộc d ạng 1 ho ặc 2, ch ỉ 5 tri ệu ng ười mang gen và b ị b ệnh. Hàng 5% BN SMA b ị đột bi ến gen SMNt thu ộc năm có kho ảng 2.000 tr ẻ được sinh ra m ắc dạng 3. C ả hai d ạng 1 và d ạng 2 đều bệnh thalassemia. Điều tr ị cho nh ững tr ẻ ch ẩn đoán được b ằng cách phân tích s ự này t ạo ra m ột gánh n ặng c ả v ề kinh t ế có m ặt hay không exon 7 SMNt , đây là cũng nh ư tinh th ần cho gia đình và toàn 14
3. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 xã h ội. Ch ẩn đoán di truy ền tr ước chuy ển - Chu ẩn b ị kích tr ứng cho ng ười m ẹ c ủa phôi là ph ươ ng pháp sàng l ọc phôi b ất các gia đình đă ng ký tham gia làm PGD. th ường v ề m ặt di truy ền, được th ực hi ện - Sinh thi ết phôi bào t ừ các phôi ngày tr ước khi c ấy phôi vào t ử cung ng ười m ẹ, 3 ho ặc ngày 5. đây là m ột ph ươ ng pháp d ự phòng hi ệu - Khu ếch đại b ộ gen t ừ t ế bào phôi sau qu ả cho các b ệnh di truy ền, trong đó có sinh thi ết b ằng b ộ kít RepliG (Qiagen). thalassemia. Để th ực hi ện được điều này, cần m ột quy trình phát hi ện đột bi ến gen - Ti ến hành ph ản ứng PCR nhân exon 7, trên m ột t ế bào. Đây c ũng là m ột khó exon 8 gen SMN t ừ các m ẫu phôi ch ẩn kh ăn c ủa k ỹ thu ật. PGD mang l ại hy v ọng đoán SMA. cho nh ững c ặp v ợ ch ồng b ị th ất b ại nhi ều - Ti ến hành nhân gen ch ạy minisequencing lần trong th ụ tinh ống nghi ệm nh ưng không và TripAssay cho các m ẫu phôi và b ố m ẹ, rõ nguyên nhân. Ngoài ra, PGD còn áp d ụng con c ủa các gia đình đã ch ẩn đoán cho nh ững bà m ẹ l ớn tu ổi để h ạn ch ế b ất thalassemia. th ường v ề di truy ền. Trên th ế gi ới hi ện nay - Ch ẩn đoán b ệnh thalassemia và SMA có kho ảng 300 gen liên quan đến b ệnh có cho các phôi đã sinh thiết. th ể được phát hi ện b ằng PGD. KẾT QU Ả NGHIÊN C ỨU VÀ Trên c ơ s ở th ực hi ện nghiên c ứu “Nghiên BÀN LU ẬN cứu quy trình ch ẩn đoán m ột s ố b ệnh di truy ền tr ước chuy ển phôi để sàng l ọc 1. K ết qu ả ch ẩn đoán phôi c ủa gia đình phôi th ụ tinh trong ống nghi ệm”, chúng tôi mang gen SMA. báo cáo: Kết qu ả b ước đầu áp d ụng quy Khu ếch đại exon 7, exon 8 c ủa gen trình ch ẩn đoán ti ền làm t ổ t ại H ọc vi ện SMN b ằng k ỹ thu ật nested-PCR b ằng hai Quân y. cặp m ồi đặc hi ệu exon 7, exon 8 gen SMN qua hai vòng. Chu trình nhi ệt PCR ĐỐI T ƯỢNG VÀ PH ƯƠ NG PHÁP được th ực hi ện trên máy khu ếch đại gen NGHIÊN C ỨU efpendorft trong điều ki ện: 960C/5 phút; [940C/1 phút; 550C/1 phút; 720C/1 phút] 1. Đối t ượng nghiên c ứu. x 25 chu k ỳ; 720C/10 phút. 20 gia đình, v ợ < 35 tu ổi, có con đang Lấy s ản ph ẩm PCR c ủa vòng 1 làm m ẫu điều tr ị t ại B ệnh vi ện Nhi Trung ươ ng và cho ph ản ứng PCR vòng 2. Chu trình Vi ện Huy ết h ọc và Truy ền máu Trung ươ ng, nhi ệt PCR th ực hi ện trên máy khu ếch đại được ch ẩn đoán b ị b ệnh SMA do m ất gen efpendorft trong điều ki ện: 960C/5 phút; đồng h ợp t ử exon 7 gen SMNt ho ặc b ị b ệnh [950C/30 giây; 550C/30giây; 720C/45 giây] x thalassemia. 35 chu k ỳ; 720C/5 phút. 2. Ph ươ ng pháp nghiên cứu. Sản ph ẩm PCR ủ v ới enzym gi ới h ạn - Tách ADN t ừ t ế bào máu ngo ại vi c ủa Dra I và DdeI trong th ời gian t ừ 2 - 3 gi ờ. bố, m ẹ và con c ủa t ất c ả gia đình có con Điện di ki ểm tra s ản ph ẩm PCR trên gel bị b ệnh thalassemia và SMA. agarose 3%. 15
4. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 - S ản phẩm sau khi c ắt enzym c ủa exon 7 gen SMNt (188 bp) và exon 7 gen SMNc (164 bp và 24 bp). - S ản ph ẩm sau khi c ắt enzym c ủa exon 8 gen SMNt (190 bp) và exon 8 gen SMNc (120 bp, 70 bp). Hình 2: Kết qu ả điện di trên gel agarose 2% s ản ph ẩm PCR c ủa gia đình BN C3: ladder 50 bp. Sản ph ẩm PCR exon 7 khi ch ưa ủ v ới enzym DraI (Ko DraI) và exon 8 khi ch ưa ủ v ới enzym DdeI (Ko DdeI) c ủa c ả b ố BN C3 (B3), m ẹ BN C3 (M3), BN C3 đều gi ống nhau, cùng có b ăng 188 bp - s ản ph ẩm nhân của exon 7 và b ăng 190 bp - s ản ph ẩm nhân exon 8. Nh ưng khi ủ s ản ph ẩm PCR v ới enzym Hình 3: Kết qu ả điện di trên gel agarose 3% DraI th ấy: sản ph ẩm PCR sau khi ủ v ới enzym gi ới - B3 và M3 đều có hai b ăng t ươ ng ứng hạn c ủa gia đình BN C7: ladder 100 bp. là 188 bp và 164 bp, có ngh ĩa c ả B3 và C3 đều có exon 7 SMNt (không b ị c ắt - Cả b ố (B7) và m ẹ (M7) c ủa BN C7 đều 188 bp), exon 7 SMNc b ị c ắt thành hai có exon 7 gen SMNt nên khi ủ s ản ph ẩm mảnh (164 bp và 24 bp). PCR v ới enzym gi ới h ạn DraI có hai b ăng - Trong khi đó con C3 ch ỉ có 1 b ăng (188 bp c ủa exon 7 SMNt và 164 bp c ủa tươ ng ứng 164 bp, ngh ĩa là con C3 b ị m ất exon 7 SMNc), t ươ ng t ự đối v ới exon 8 đồng h ợp exon 7 SMNt, ch ỉ có exon 7 của gen SMN . Nh ư v ậy, BN C7 c ũng m ất SMNc nên b ị enzym gi ới h ạn c ắt thành đồng h ợp exon 7 và exon 8 c ủa gen hai b ăng (164 bp, 24 bp), điều này phù h ợp SMNt . BNC3 m ất đồng h ợp exon 7 và 8 với k ết qu ả c ủa B ệnh vi ện Nhi Trung ươ ng. gen SMNt . 16
5. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 Các phôi sinh thi ết c ủa 3 gia đình có con b ị b ệnh SMA cũng được ch ẩn đoán b ằng ph ươ ng pháp này. Gia đình s ố 3 có 3 phôi sinh thi ết ngày 3; gia đình s ố 7 th ụ tinh được 3 phôi, nh ưng các phôi không phát tri ển đến ngày 3. Do v ậy, không có phôi sinh thi ết; gia đình s ố 18 được 5 phôi sinh thi ết ngày 3. Chúng tôi thu được m ột s ố k ết qu ả sau: Bảng 1: Kết qu ả phát hi ện đột bi ến gen SMNt trên máu toàn ph ần và trên phôi sinh thi ết c ủa 3 gia đình có con m ắc b ệnh SMA. Gen SMNt Gen SMNt Gen SMNt TT BN Bố BN Mẹ BN Exon 7 Exon 8 Exon 7 Exon 8 Exon 7 Exon 8 1 SMAC3 - - SMAB3 + + SMAM3 + + P1_3 + + P2_3 + + P3_3 + + Kết qu ả: được 1 phôi bình th ường 2 SMAC7 - - SMAB7 + + SMAM7 + + Không có phôi sinh thi ết 3 SMAC18 - - SMAB18 + + SMAM18 + + P1_18 - - P2_18 - - P3_18 - - P4_18 + + P5_18 - - Kết qu ả: phôi s ố 4 được chuy ển và thành công Tất c ả b ố, m ẹ c ủa các BN trên đều có m ặt exon 7, 8 SMNt và th ực t ế, các c ặp b ố mẹ đều là ng ười không có bi ểu hi ện b ệnh SMA. Ngh ĩa là, m ột nhi ễm s ắc th ể trong c ặp tươ ng đồng s ố 5 có gen SMNt bình th ường (d ạng d ị h ợp) c ũng d ịch mã đủ l ượng protein SMN (survival motor neurone) cho t ế bào th ần kinh v ận động ho ạt động bình th ường. Các phôi bình th ường c ủa nh ững gia đình này được chuy ển phôi, k ết qu ả: 2 gia đình có con b ị b ệnh SMA đã có con kh ỏe m ạnh. (Lê Th ị H, Nguy ễn V ăn V, SMA, ch ọc noãn 25/11/2014 chuy ển phôi l ần 1 không k ết qu ả; chuy ển phôi l ần 2 ngày 30/3/2015, sinh con kh ỏe m ạnh ngày 12/12/2015. Ph ạm Th ị Vi ệt H, Nguy ễn Tu ấn A, SMA Ngh ệ An; chọc noãn 19/5/2015, sinh thi ết 5 phôi; phôi 1 b ị b ệnh; phôi 2, 3, 4 bình th ường; phôi 5 ch ưa có thông tin di truy ền; chuy ển phôi ngày 18/6/2015; đã mang thai, sinh con gái ngày 28/2/2016. Gia đình Ph ạm Th ị H, Nguy ễn V ăn V, SMA; ch ọc noãn ngày 16/12/2014; sinh thi ết được 3 phôi; phôi 1; phôi 2 bình th ường; phôi 3 b ị b ệnh; chuy ển phôi 12/3/16, không k ết qu ả). 17
6. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 2. K ết qu ả ch ẩn đoán thalassemia c ủa gia đình và m ẫu phôi sinh thi ết c ủa 17 gia đình tham gia nghiên c ứu. Hình 3: Hình ảnh điện di t ự động s ản ph ẩm minisequencing m ẫu THM16, THB16. THM16 mang ki ểu gen d ị h ợp t ử Cd26, píc trên màu đen là nucleotid C (bình th ường), píc d ưới màu đỏ là nucleotid T ( đột bi ến). THB16 mang ki ểu gen d ị h ợp t ử Cd17, píc trên xanh lá cây là nucleotid A ( đột bi ến), píc d ưới đỏ là nucleotid T (bình th ường). Hình 4: Hình ảnh điện di t ự động s ản ph ẩm minisequencing m ẫu THC16. Mẫu nghiên c ứu THC16 mang ki ểu gen d ị h ợp t ử c ả hai đột bi ến Cd26/Cd17. 18
7. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 Hình 5: Hình ảnh TripAssay c ủa m ẫu nghiên c ứu THB16, THC16, THM16. Kết qu ả ch ẩn đoán xác định đột bi ến b ằng k ỹ thu ật minisequencing được ki ểm ch ứng bằng b ộ kít TripAssay cho k ết qu ả phù h ợp: v ị trí đột bi ến trên m ẫu c ủa b ố là Cd17 d ị hợp t ử, m ẹ là Cd26 d ị h ợp t ử, con mang c ả 2 đột bi ến Cd17 và Cd26. Hình 6: Hình ảnh điện di t ự động s ản ph ẩm minisequencing m ẫu THB24, THM24. THB24, THM24 mang ki ểu gen d ị h ợp t ử Cd17, píc trên xanh lá cây là nucleotid A (đột bi ến), píc d ưới đỏ là nucleotid T (bình th ường). 19
8. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 Hình 7: Hình ảnh điện di t ự động s ản ph ẩm minisequencing m ẫu THC24. THC24 mang ki ểu gen đồng h ợp t ử Cd17, ch ỉ xu ất hi ện 1 píc xanh lá cây A ( đột bi ến). Gia đình này có 6 phôi được sinh thi ết ngày 5 để ch ẩn đoán xác định đột bi ến v ới kết qu ả: 1 phôi bình th ường không mang gen đột bi ến (phôi s ố 1), 2 phôi đồng h ợp t ử Cd17 (phôi 2 và phôi 3) và 3 phôi mang gen d ị h ợp t ử Cd17 (phôi s ố 4, 5, 6). D ưới đây là kết qu ả nhân gen b ằng k ỹ thu ật minsequencing và ki ểm tra lại b ằng b ộ kít TripAssay: Hình 8: Hình ảnh điện di minisequenicng 6 phôi c ủa gia đình 24. Từ hình ảnh trên cho th ấy m ẫu s ố 1 có xu ất hi ện píc hu ỳnh quang c ủa nucleotid T, đây là v ị trí nucleotid bình th ường. Do v ậy, phôi s ố 1 này là m ột phôi không mang gen gây b ệnh, phôi bình th ường. Phôi s ố 2 và phôi s ố 3 đều xu ất hi ện píc hu ỳnh quang c ủa nucleotid A. V ị trí nucleotid này là v ị trí đột bi ến, do v ậy phôi s ố 2 và phôi s ố 3 mang gen đồng h ợp t ử Cd17, phôi b ị b ệnh. Các phôi s ố 4, 5, 6 xu ất hi ện c ả 2 píc hu ỳnh quang c ủa nucleotid A và T, do đó các phôi này mang gen d ị h ợp t ử Cd17, phôi ch ỉ mang gen nh ưng không phát hi ện b ệnh. 20
9. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 Hình 9: Hình ảnh ch ẩn đoán 6 phôi sinh thi ết b ằng kít TripAssay. Đây là hình ảnh ch ẩn đoán 6 phôi sinh thi ết ngày 5 c ủa gia đình s ố 24, trong 6 phôi này, 2 phôi mang gen đồng h ợp t ử Cd17, là phôi s ố 2 và s ố 3. Các phôi này khi lai TripAssay th ấy xu ất hi ện v ạch t ại v ị trí đột bi ến Cd17 và m ất c ả v ạch t ại v ị trí bình th ường c ủa Cd17. Phôi s ố 1 không xu ất hi ện v ạch đột bi ến. Do v ậy, phôi s ố 1 bình th ường. Phôi s ố 4, 5, 6 xu ất hi ện v ạch đột bi ến, nh ưng ch ưa m ất v ạch ở v ị trí bình th ường nên các phôi này ch ỉ mang gen d ị h ợp t ử Cd17, phôi không bi ểu hi ện b ệnh. Tươ ng t ự nh ư trên, k ết qu ả c ủa gia đình s ố 23 được 16 phôi ngày 3, trong đó 14 phôi t ốt 6 - 10 t ế bào, 2 phôi 4 - 6 t ế bào, ngày 5 có 5 phôi phát tri ển bình th ường được sinh thi ết. Đã ch ẩn đoán di truy ền b ệnh thalassemia cho t ất c ả các phôi. M ột s ố gia đình t ạo được phôi, nh ưng các phôi phát tri ển b ất th ường; Do v ậy, không có phôi sinh thi ết. M ột s ố gia đình có phôi được ch ẩn đoán và đang được chuy ển phôi, m ột s ố gia đình khác phôi đã chuy ển l ần 1, nh ưng ch ưa đậu phôi, đang ch ờ chuy ển l ần 2. Trong s ố nh ững BN thalassemia, có 5 gia đình đậu phôi, trong đó 2 gia đình đã sinh con kh ỏe m ạnh và 3 gia đình đang mang thai. 21
10. T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 6-2016 KẾT LU ẬN 5. Taylor JE, Thomas NH, Lewis CM et al . Correlation of SMNt and SMNc gene copy - Đã xây d ựng quy trình ch ẩn đoán m ột number with age of onset and survival in số b ệnh di truy ền tr ước chuy ển phôi để spinal muscular atrophy. Eur J Hum. Genet. sàng l ọc phôi th ụ tinh trong ống nghi ệm. 1998, 6, pp.467-474. - Đã ứng d ụng quy trình PGD thành 6. Ng IS, Law HY. Challenges in screening công trên BN thalassemia và SMA, t ổng and prevention of thalassaemia in Singapore. số 7 gia đình, trong đó 2 gia đình SMA và Asian-Oceanian Journal of Paediatrics and 5 gia đình thalassemia. Child Health. 2003, 2, pp.29-38. 7. Wang W, Kham SK, Yeo GH, Quah TC, TÀI LI ỆU THAM KH ẢO Chong SS . Multiplex minisequencing screen 1. Dreesen JC, Bras M, Die - Smulders C for common Southeast Asian and Indian beta- et al. Preimplantation genetic diagnosis of thalassaemia mutations. Clin Chem. 2003, 49, spinal muscular atrophy. Mol Hum Reprod. pp.209-218. 1998, 4 (9), pp.881-885. 8. Kuliev A, Rechitsky S, Verlinsky O, 2. Graeme Daniels, Rachel Pettigrew, Alan Ivakhnenko V, Evsikov S, Wolf G et al. Thornhill et al. Six unaffected livebirths Preimplantation diagnosis of thalassaemias. following preimplatation diagnosis for spinal J Assist Reprod Genet 1998, 15, pp.219-225. muscular atrophy. Mol Hum Reprod. 2001, 7 (10), pp.995-1000. 9. Deng J, Peng WL, Li J, Fang C, Liang XY, Zeng YH et al. Successful preimplantation 3. Lefebvre S, Burglen L, Reboullet S et al . genetic diagnosis for alpha-and beta- Identification and characterization of a spinal thalassaemia in China. Prenat Diagn. 2006, 26, muscular atrophy-determining gene. Cell. 1995, 80, pp.155-165. pp.1021-1028. 4. Rodrigues NR, Owen N, Talbot K, 10. De Rycke M, Van de Velde H, Sermon Ignatius J, Dubowitz V, Davies KE. Deletions K, Lissens W, De Vos A, Vandervorst M et al. in the survival motor neurone gene on 5q13 in Preimplantation genetic diagnosis for sickle- autosomal recessive spinal muscular atrophy. cell anemia and for beta-thalassaemia. Prenat Hum Mol Genet. 1995, 4, pp.631-634. Diagn. 2001, 21, pp.214-222. 22